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O le fa'avaeina o fa'ata'ita'iga o manu o suiga fa'apitoa (MC) o se fa'avae taua mo le su'esu'eina o le MC. E limasefulu fa lapiti pa'epa'e Niu Sila na vaevaeina i le vaega o le sham-operation, le vaega o le fa'apipi'iina o maso (vaega ME) ma le vaega o le fa'apipi'iina o le nucleus pulposus (vaega NPE). I le vaega NPE, na fa'aalia ai le tisiketi intervertebral e ala i le auala taotoga anterolateral lumbar ma fa'aaoga se nila e tui ai le tino o le vertebral L5 e lata ane i le pito i tua. Na aveese le NP mai le tisiketi intervertebral L1/2 e ala i se nila ma tuiina i totonu. O le viliina o se pu i le ponaivi subchondral. O faiga taotoga ma metotia o le viliina i le vaega o le fa'apipi'iina o maso ma le vaega o le sham-operation sa tutusa ma i latou i le vaega o le NP. I le vaega ME, na tu'u ai se fasi maso i totonu o le pu, ae i le vaega o le sham-operation, e leai se mea na tu'uina i totonu o le pu. Ina ua mae'a le taotoga, na faia ai le MRI scan ma le su'ega molecular biology. Na suia le fa'ailoga i le vaega NPE, ae leai se suiga manino o fa'ailoga i le vaega o le sham-operation ma le vaega ME. O le mata'ituina o le histological na fa'aalia ai le fa'atupula'ia o a'ano e le masani ai i le nofoaga na fa'apipi'i ai, ma o le fa'aalia o le IL-4, IL-17 ma le IFN-γ na fa'ateleina i le vaega NPE. O le fa'apipi'iina o le NP i totonu o le ponaivi subchondral e mafai ona fausia ai se fa'ata'ita'iga manu o le MC.
O suiga fa'apitoa (MC) o ni manu'a ia o le vertebral endplates ma le ponaivi e lata ane e mafai ona vaaia i le magnetic resonance imaging (MRI). E masani lava ona tupu i tagata ta'ito'atasi e iai ni fa'ailoga e feso'ota'i i ai1. E tele su'esu'ega ua fa'amamafaina ai le taua o le MC ona o lona fesoota'iga ma le tiga o le tua i lalo (LBP)2,3. Na fa'amatalaina tuto'atasi e de Roos et al.4 ma Modic et al.5 ni ituaiga eseese se tolu o fa'aletonu o fa'ailoga subchondral i le ponaivi o le vertebral. O suiga o le ituaiga Modic I e maualuga tele i luga o fa'asologa o le T1-weighted (T1W) ma e tele naua i luga o fa'asologa o le T2-weighted (T2W). O lenei manu'a e fa'aalia ai ni fissure endplates ma ni a'ano vascular granulation e lata ane i le ponaivi o le ponaivi. O suiga o le ituaiga Modic II e fa'aalia ai le fa'ailoga maualuga i luga o fa'asologa uma e lua o le T1W ma le T2W. I lenei ituaiga o manu'a, e mafai ona maua le fa'aleagaina o le endplate, fa'apea fo'i ma le suia o ga'o histological o le ponaivi e lata ane. O suiga o le ituaiga Modic III e fa'aalia ai le fa'ailoga maualalo i fa'asologa o le T1W ma le T2W. Ua matauina manu'a sclerotic e fetaui ma endplates6. O le MC ua manatu o se faʻamaʻi pipisi o le ivi tuasivi ma e fesoʻotaʻi vavalalata ma le tele o faʻamaʻi e faʻaleagaina ai le ivi tuasivi7,8,9.
I le iloiloina o faʻamaumauga o loʻo maua, o le tele o suʻesuʻega ua tuʻuina mai ai ni malamalamaga auiliili i le mafuaʻaga ma faiga faʻamaʻi o le MC. Na fautua mai Albert ma isi e ono mafua le MC i le herniation o le tisiketi8. Na faʻapea mai Hu ma isi e mafua le MC i le faʻaleagaina tele o le tisiketi10. Na fautuaina e Kroc le manatu o le "internal disc rupture," lea e taʻu mai ai o le faʻalavelave faifai pea o le tisiketi e ono oʻo atu ai i ni microtears i le endplate. A maeʻa ona fausia le cleft, o le faʻaleagaina o le endplate e le nucleus pulposus (NP) e ono mafua ai se tali atu o le autoimmune, lea e atili ai ona oʻo atu ai i le atinaʻeina o le MC11. Na faʻasoa e Ma ma isi se manatu faʻapena ma lipotia mai o le NP-induced autoimmunity e iai sona sao taua i le pathogenesis o le MC12.
O sela o le tino puipuia, aemaise lava CD4+ T lymphocytes fesoasoani, e iai se sao taua i le pathogenesis o le autoimmunity13. O le vaega o le Th17 na faatoa maua talu ai nei e gaosia ai le proinflammatory cytokine IL-17, faʻalauiloa ai le faʻaalia o le chemokine, ma faʻaosofia ai sela T i totoga ua faʻaleagaina e gaosia ai le IFN-γ14. E iai foʻi se sao tulaga ese o sela Th2 i le pathogenesis o tali atu o le tino puipuia. O le faʻaalia o le IL-4 o se sui o le sela Th2 e mafai ona oʻo atu ai i ni taunuuga ogaoga o le immunopathological15.
E ui ina tele suʻesuʻega faafomaʻi ua faia i le MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, ae o loʻo i ai pea le le lava o faʻataʻitaʻiga talafeagai i manu e mafai ona faʻataʻitaʻi le faiga o le MC lea e masani ona tupu i tagata ma e mafai ona faʻaaogaina e suʻesuʻe ai le mafuaʻaga poʻo togafitiga fou e pei o togafitiga faʻapitoa. I le taimi nei, e naʻo ni nai faʻataʻitaʻiga manu o le MC ua lipotia mai o loʻo suʻesuʻeina faiga faʻapitoa o loʻo i lalo.
E faʻavae i luga o le talitonuga o le autoimmune na fautuaina e Albert ma Ma, o lenei suʻesuʻega na faʻavaeina ai se faʻataʻitaʻiga faigofie ma toe gaosia o le lapiti MC e ala i le otometi lava ona totoina o le NP i tafatafa o le vertebral end plate ua viliina. O isi sini o le matauina lea o uiga faʻasolopito o faʻataʻitaʻiga o manu ma iloilo auala faʻapitoa o le NP i le atinaʻeina o le MC. Mo lenei faʻamoemoe, matou te faʻaaogaina ni metotia e pei o le molecular biology, MRI, ma suʻesuʻega faʻasolopito e suʻesuʻe ai le alualu i luma o le MC.
E lua lapiti na maliliu i le tafe toto i le taimi o le taotoga, ma e fa lapiti na maliliu i le taimi o le fa'agase i le taimi o le MRI. O lapiti e 48 na totoe na sao mai ma e le'i faaalia ni faailoga o amioga po o neura ina ua mae'a le taotoga.
Ua faaalia i le MRI o le malosi o faailoilo o le aano ua faapipiiina i pu eseese e eseese. O le malosi o faailoilo o le tino o le vertebral L5 i le vaega NPE na suia malie i le 12, 16 ma le 20 vaiaso talu ona faapipiiina (o le faasologa o le T1W na faaalia ai le faailoilo maualalo, ma o le faasologa o le T2W na faaalia ai le faailoilo fefiloi faatasi ai ma le faailoilo maualalo) (Ata 1C), ae o foliga vaaia o le MRI o isi vaega e lua o vaega ua faapipiiina na tumau pea le mautu i le vaitaimi lava lea e tasi (Ata 1A, B).
(A) Fa'asologa fa'atusa o MRI o le ivi tua o le lapiti i taimi e 3. E leai ni fa'aletonu o fa'ailo na maua i ata o le vaega o le sham-operation. (B) O uiga fa'ailo o le tino o le ivi tua i le vaega o le ME e tutusa ma uiga o lo'o i le vaega o le sham-operation, ma e leai se suiga taua o fa'ailo na matauina i le nofoaga o lo'o fa'apipi'i ai i le aluga o taimi. (C) I le vaega o le NPE, o le fa'ailo maualalo e manino lava le va'aia i le fa'asologa o le T1W, ma o le fa'ailo fefiloi ma le fa'ailo maualalo e manino lava le va'aia i le fa'asologa o le T2W. Mai le vaitaimi o le 12-vaiaso i le vaitaimi o le 20-vaiaso, o fa'ailo maualuga fa'asolosolo e si'omia ai fa'ailo maualalo i le fa'asologa o le T2W e fa'aitiitia.
E mafai ona vaaia le hyperplasia manino o ponaivi i le nofoaga ua fa'apipi'i ai le tino o le vertebral i le vaega NPE, ma e vave ona tupu le hyperplasia o ponaivi mai le 12 i le 20 vaiaso (Ata 2C) pe a fa'atusatusa i le vaega NPE, e leai se suiga taua na matauina i tino o le vertebral ua fa'ata'ita'iina; Vaega Sham ma le vaega ME (Ata 2C) 2A,B).
(A) O le fogāeleele o le tino o le tuasivi i le vaega ua totoina e matuā lamolemole, e lelei le fa'amalologa o le pu, ma e leai se hyperplasia i le tino o le tuasivi. (B) O le foliga o le nofoaga ua totoina i le vaega ME e tutusa ma le foliga o le vaega o taotoga pepelo, ma e leai se suiga manino i le foliga o le nofoaga ua totoina i le aluga o taimi. (C) Na tupu le hyperplasia o ponaivi i le nofoaga ua totoina i le vaega NPE. Na vave ona fa'ateleina le hyperplasia o ponaivi ma e o'o lava i le tisiketi intervertebral i le tino o le tuasivi contralateral.
O le suʻesuʻega o le histological e maua ai faʻamatalaga auiliili e uiga i le fausiaina o ponaivi. O loʻo faʻaalia i le Ata 3 ata o vaega na faia i le maeʻa ai o le taotoga na valiina i le H&E. I le vaega na faia le sham-operation, sa lelei le faʻatulagaina o chondrocytes ma e leai se faʻateleina o sela na iloa (Ata 3A). O le tulaga i le vaega ME sa tutusa ma le tulaga i le vaega na faia le sham-operation (Ata 3B). Peitaʻi, i le vaega NPE, o le tele o chondrocytes ma le faʻateleina o sela e pei o le NP na matauina i le nofoaga na faʻapipiʻi ai (Ata 3C);
(A) E mafai ona vaaia trabeculae e lata ane i le pito i tua, o chondrocytes ua faatulagaina lelei ma tutusa le tele ma le foliga o sela ma e leai se tuputupu aʻe (40 taimi). (B) O le tulaga o le nofoaga ua faʻapipiʻiina ai i le vaega ME e tutusa ma le vaega sham. E mafai ona vaaia trabeculae ma chondrocytes, ae e leai se tuputupu aʻe manino i le nofoaga ua faʻapipiʻiina ai (40 taimi). (B) E mafai ona vaaia o chondrocytes ma NP-like cells e tuputupu aʻe tele, ma o foliga ma le tele o chondrocytes e le tutusa (40 taimi).
O le fa'aalia o le interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, ma le interferon γ (IFN-γ) mRNA na matauina i vaega uma e lua o le NPE ma le ME. Ina ua fa'atusatusa le maualuga o le fa'aalia o kenera fa'amoemoeina, o fa'aalia o kenera o le IL-4, IL-17, ma le IFN-γ na matua'i fa'ateleina i le vaega NPE pe a fa'atusatusa i le vaega o le ME ma le vaega o le sham operation (Ata 4) (P < 0.05). Pe a fa'atusatusa i le vaega o le sham operation, o le maualuga o le fa'aalia o le IL-4, IL-17, ma le IFN-γ i le vaega o le ME na fa'ateleina teisi lava ma e le'i o'o atu i le suiga fa'amaufa'ailoga (P > 0.05).
O le faʻaalia o le mRNA o le IL-4, IL-17 ma le IFN-γ i le vaega NPE na faʻaalia ai se aga maualuga tele nai lo i latou i le vaega o le sham operation ma le vaega ME (P < 0.05).
I se faatusatusaga, o le maualuga o le faʻaalia i le vaega ME e leai se eseesega taua na faaalia (P>0.05).
Sa faia le su'esu'ega o le Western blot e fa'aaoga ai antibodies o lo'o maua fa'apisinisi e fa'asaga i le IL-4 ma le IL-17 e fa'amaonia ai le suiga o le mamanu o le fa'aalia o le mRNA. E pei ona fa'aalia i Ata 5A,B, pe a fa'atusatusa i le vaega ME ma le vaega sham operation, o le maualuga o le porotini o le IL-4 ma le IL-17 i le vaega NPE sa matua fa'ateleina (P < 0.05). Pe a fa'atusatusa i le vaega sham operation, o le maualuga o le porotini o le IL-4 ma le IL-17 i le vaega ME sa le'i ausia fo'i ni suiga taua fa'amau'a (P> 0.05).
(A) O le maualuga o le porotini o le IL-4 ma le IL-17 i le vaega NPE sa matua maualuga atu nai lo le vaega ME ma le vaega placebo (P < 0.05). (B) Western blot histogram.
Ona o le itiiti o faʻataʻitaʻiga o tagata na maua i le taimi o taotoga, o suʻesuʻega manino ma auiliili i le pathogenesis o le MC e fai si faigata. Sa matou taumafai e faʻatuina se faʻataʻitaʻiga manu o le MC e suʻesuʻe ai ona faiga faʻapitoa. I le taimi lava e tasi, o le iloiloga o le radiology, iloiloga o histological ma le iloiloga o meaola molecular na faʻaaogaina e mulimuli ai i le ala o le MC na mafua mai i le NP autograft. O se taunuuga, o le faʻataʻitaʻiga o le faʻapipiʻiina o le NP na mafua ai se suiga malie i le malosi o le faʻailoga mai le 12-vaiaso i le 20-vaiaso taimi (fefiloi o faʻailoga maualalo i faʻasologa o le T1W ma faʻailoga maualalo i faʻasologa o le T2W), e faʻaalia ai suiga o aano, ma o iloiloga o le histological ma le molecular biology na faʻamaonia ai taunuuga o le suʻesuʻega radiological.
O taunuuga o lenei faʻataʻitaʻiga o loʻo faʻaalia ai na tutupu suiga vaaia ma faʻamatalaga i le nofoaga na solia ai le tino o le vertebral i le vaega NPE. I le taimi lava e tasi, na matauina ai le faʻaalia o le IL-4, IL-17 ma le IFN-γ genes, faʻapea foʻi ma le IL-4, IL-17 ma le IFN-γ, o loʻo faʻaalia ai o le solia o le autologous nucleus pulposus tissue i le tino o le vertebral e ono mafua ai se faasologa o faʻailoga ma suiga faʻaletino. E faigofie ona iloa o uiga faʻailoga o tino o le vertebral o le faʻataʻitaʻiga manu (faʻailoga maualalo i le faʻasologa o le T1W, faʻailoga fefiloi ma faʻailoga maualalo i le faʻasologa o le T2W) e matua tutusa lava ma sela o le vertebral o le tagata, ma o uiga o le MRI e faʻamaonia ai foʻi le matauina o le histology ma le tino atoa, o lona uiga, o suiga i sela o le tino o le vertebral e faʻasolosolo malie. E ui lava o le tali atu o le mumū e mafua mai i manuʻa faʻafuaseʻi e ono aliali mai i se taimi vave pe a uma le tui, ae o taunuuga o le MRI na faʻaalia ai o suiga faʻailoga e faʻasolosolo malie ona faʻateleina na aliali mai i le 12 vaiaso talu ona uma le tui ma tumau pea i le 20 vaiaso e aunoa ma ni faʻailoga o le toe faʻaleleia poʻo le toe faʻafoʻisia o suiga o le MRI. O nei taunuuga e faʻaalia ai o le autologous vertebral NP o se metotia faʻatuatuaina mo le faʻatuina o le progressive MV i lapiti.
O lenei faʻataʻitaʻiga o le tuiina e manaʻomia ai le tomai talafeagai, taimi, ma le taumafaiga faʻapitoa. I faʻataʻitaʻiga muamua, o le tipiina poʻo le faʻaosofia tele o fausaga o le paravertebral ligamentous e ono iʻu ai i le fausiaina o vertebral osteophytes. E tatau ona faʻaeteete ina ia aua neʻi faʻaleagaina pe faʻaita ia tisiketi e lata ane. Talu ai e tatau ona pulea le loloto o le tuiina ina ia maua ai ni taunuuga tutusa ma mafai ona toe gaosia, na matou faia lima se poloka e ala i le tipiina o le ufi o se nila e 3 mm le umi. O le faʻaaogaina o lenei poloka e faʻamautinoa ai le loloto tutusa o le viliina i le tino o le vertebral. I faʻataʻitaʻiga muamua, e toʻatolu fomaʻi tipitipi o ponaivi na aʻafia i le taotoga na latou maua o nila e 16-gauge e faigofie ona faʻaaogaina nai lo nila e 18-gauge poʻo isi metotia. Ina ia ʻalofia le tele o le toto i le taimi o le viliina, o le uuina pea o le nila mo sina taimi o le a maua ai se pu e sili atu ona talafeagai mo le tuiina, ma faʻaalia ai e mafai ona pulea se tulaga patino o le MC i lenei auala.
E ui o le tele o suʻesuʻega ua faʻatatau i le MC, ae e itiiti se mea e iloa e uiga i le mafuaʻaga ma le pathogenesis o le MC25,26,27. E faʻavae i luga o a matou suʻesuʻega na muamua atu, na matou iloa ai o le autoimmune e iai sona sao taua i le tupu mai ma le atinaʻeina o le MC12. O lenei suʻesuʻega na suʻesuʻeina ai le faʻaalia o le IL-4, IL-17, ma le IFN-γ, o auala autu ia o le eseesega o sela CD4+ pe a uma ona faʻaosofia le antigen. I la matou suʻesuʻega, pe a faʻatusatusa i le vaega e leʻi maua, o le vaega NPE e maualuga atu le faʻaalia o le IL-4, IL-17, ma le IFN-γ, ma o le maualuga o le porotini o le IL-4 ma le IL-17 sa maualuga atu foʻi.
I le tulaga faafoma'i, o le fa'aalia o le IL-17 mRNA e fa'ateleina i sela NP mai gasegase e iai le herniation o le tisiketi28. O le fa'ateleina o le maualuga o le fa'aalia o le IL-4 ma le IFN-γ na maua fo'i i se fa'ata'ita'iga o le herniation o le tisiketi e le o fa'apipi'i pe a fa'atusatusa i tagata soifua maloloina29. O le IL-17 e iai sona sao taua i le mumū, manu'a o a'ano i fa'ama'i autoimmune30 ma fa'aleleia atili ai le tali atu o le puipuiga o le tino i le IFN-γ31. Ua lipotia mai le fa'ateleina o manu'a o a'ano e mafua mai i le IL-17 i isumu MRL/lpr32 ma isumu e ono a'afia i le autoimmune33. E mafai e le IL-4 ona taofia le fa'aalia o cytokines proinflammatory (e pei o le IL-1β ma le TNFα) ma le fa'agaoioiga o le macrophage34. Na lipotia mai o le fa'aalia o le mRNA o le IL-4 e ese i le vaega NPE pe a fa'atusatusa i le IL-17 ma le IFN-γ i le taimi lava e tasi; O le fa'aalia o le mRNA o le IFN-γ i le vaega NPE e sili atu le maualuga nai lo isi vaega. O le mea lea, o le gaosiga o le IFN-γ atonu o se fa'alavelave i le tali atu o le mumū e mafua mai i le intercalation o le NP. Ua faʻaalia i suʻesuʻega o le IFN-γ e gaosia e le tele o ituaiga sela, e aofia ai sela T fesoasoani ituaiga 1 ua faʻagaoioia, sela fasioti tagata masani, ma macrophages35,36, ma o se cytokine autu e faʻaosofia ai le mumū e faʻalauiloa ai tali atu i le puipuiga o le tino37.
O lenei suʻesuʻega o loʻo fautua mai ai atonu e aʻafia le tali atu o le tino i le tupu mai ma le atinaʻeina o le MC. Na maua e Luoma ma isi e tutusa uiga o faʻailoga o le MC ma le NP iloga i le MRI, ma e lua uma e faʻaalia ai le faʻailoga maualuga i le faʻasologa o le T2W38. O nisi cytokines ua faʻamaonia e fesoʻotaʻi vavalalata ma le tupu mai o le MC, e pei o le IL-139. Na fautua mai Ma ma isi e faʻapea o le alu aʻe i luga poʻo lalo o le NP atonu e iai se aafiaga tele i le tupu mai ma le atinaʻeina o le MC12. Na lipotia mai e Bobechko40 ma Herzbein ma isi 41 o le NP o se aano e teteʻe i le puipuiga o le tino e le mafai ona ulufale i le tafega o le toto mai le taimi e fanau mai ai. O le alu aʻe o le NP e faʻaofi mai ai ni mea ese i totonu o le toto, ma faʻapea ona faʻalavelaveina ai tali atu o le tino i le lotoifale42. O tali atu o le tino e mafai ona faʻaosofia ai le tele o mea e puipuia ai le tino, ma a faʻaauau pea ona faʻaalia nei mea i aano, e mafai ona latou mafua ai suiga i faʻailoga43. I lenei suʻesuʻega, o le soona faʻaalia o le IL-4, IL-17 ma le IFN-γ o mea masani ia e puipuia ai le tino, e faʻamaonia atili ai le sootaga vavalalata i le va o le NP ma le MCs44. O lenei faʻataʻitaʻiga manu e faʻataʻitaʻi lelei le alualu i luma o le NP ma le ulufale atu i le end plate. O lenei faiga na faʻaalia atili ai le aʻafiaga o le autoimmunity i le MC.
E pei ona faʻamoemoeina, o lenei faʻataʻitaʻiga manu e maua ai se faʻavae e mafai ona suʻesuʻeina ai le MC. Peitaʻi, o lenei faʻataʻitaʻiga o loʻo i ai pea ni faʻatapulaʻa: muamua, i le taimi o le vaʻaiga o manu, o nisi lapiti i le tulaga ogatotonu e manaʻomia ona fasiotia mo suʻega histological ma molecular biology, o lea o nisi manu "e le toe faʻaaogaina" i le aluga o taimi. Lua, e ui lava e tolu taimi atofaina i lenei suʻesuʻega, ae paga lea, na o le tasi le ituaiga MC (Modic type I change) na matou faʻataʻitaʻiina, o lea e le lava lea e faʻatusalia ai le faagasologa o le atinaʻeina o faʻamaʻi o le tagata, ma e manaʻomia ona setiina nisi taimi atofaina e sili atu ona mataʻituina ai suiga uma o faʻailoga. Tolu, o suiga i le fausaga o aano e mafai ona faʻaalia manino e ala i le valivali histological, ae o nisi metotia faʻapitoa e mafai ona faʻaalia lelei ai suiga o microstructural i lenei faʻataʻitaʻiga. Mo se faʻataʻitaʻiga, na faʻaaogaina le polarized light microscopy e iloilo ai le fausiaina o fibrocartilage i lapiti intervertebral discs45. O aafiaga umi o le NP i le MC ma le endplate e manaʻomia ai nisi suʻesuʻega.
E limasefulufa lapiti paʻepaʻe tane Niu Sila (e tusa ma le 2.5-3 kg le mamafa, 3-3.5 masina le matua) na vaevaeina faafuaseʻi i le vaega o taotoga pepelo, vaega o le totoina o maso (vaega ME) ma le vaega o le totoina o aʻa neura (vaega NPE). O faiga faataitai uma na faamaonia e le Komiti o Amioga Mama a le Falemai o Tianjin, ma o metotia faataitai na faatinoina e tusa ai ma taiala ua faamaonia.
Ua faia ni faaleleiga i le metotia o taotoga a S. Sobajima 46. Sa tuu lapiti taitasi i se tulaga taoto i autafa ma sa faaalia le pito i luma o tisiketi intervertebral lumbar e lima sosoo (IVDs) e faaaoga ai le auala retroperitoneal posterolateral. Sa tuuina atu i lapiti taitasi le vai faagase lautele (20% urethane, 5 ml/kg e ala i le alatoto taliga). Sa faia se tipiina o le pa'u umi mai le pito i lalo o ivi 'asoaso i le pito o le pelvic, 2 cm ventral i maso paravertebral. O le ivi tua taumatau anterolateral mai le L1 i le L6 sa faaalia e ala i le tipiina ma'ai ma le matuitui o le aano o le subcutaneous o lo'o i luga, aano retroperitoneal, ma maso (Ata 6A). Sa fuafuaina le tulaga o le tisiketi e faaaoga ai le pito o le pelvic o se faailoga anatomical mo le tulaga o le tisiketi L5-L6. Faaaoga se nila tuiina 16-gauge e vili ai se pu e lata ane i le pito i tua o le vertebra L5 i le loloto e 3 mm (Ata 6B). Faaaoga se tui e 5-ml e miti ai le autologous nucleus pulposus i totonu o le L1-L2 intervertebral disc (Ata 6C). Aveese le nucleus pulposus po'o le maso e tusa ai ma mana'oga o vaega ta'itasi. A uma ona fa'alolotoina le pu e vili ai, ona tu'u lea o su'i e mitiia i luga o le fascia loloto, le fascia pito i luga ma le pa'u, ma ia fa'aeteete ne'i fa'aleagaina le a'ano periosteal o le vertebral body i le taimi o le taotoga.
(A) O le tisiketi L5–L6 e fa'aalia e ala i le auala posterolateral retroperitoneal. (B) Faaaoga se nila 16-gauge e vili ai se pu e lata ane i le L5 endplate. (C) O le a seleseleina Autologous MFs.
Sa tu'uina atu le vai fa'agase lautele i le 20% o le urethane (5 ml/kg) e ala i le alatoto o le taliga, ma sa toe faia ata X-ray o le tuasivi lumbar i le 12, 16, ma le 20 vaiaso talu ona mae'a le taotoga.
Sa faia taulaga i lapiti e ala i le tuiina o le ketamine (25.0 mg/kg) i totonu o le tino ma le tuiina i totonu o le uaua o le sodium pentobarbital (1.2 g/kg) i le 12, 16 ma le 20 vaiaso talu ona maeʻa le taotoga. Sa aveese atoa le ivi tuasivi mo le suʻesuʻega o le histological ma faia ai le suʻesuʻega moni. Sa faʻaaogaina le quantitative reverse transcription (RT-qPCR) ma le Western blotting e iloa ai suiga i mea e puipuia ai le tino.
Sa faia suʻesuʻega MRI i lapiti e faʻaaoga ai se maneta faʻafomaʻi 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) ua faʻapipiʻiina i se orthogonal limb coil receiver. Sa faʻamoe lapiti i le 20% urethane (5 mL/kg) e ala i le alatoto o le taliga ona tuʻu lea i totonu o le maneta ma le vaega o le lumbar o loʻo faʻatotonugalemu i luga o se 5-inisi le lautele o le liʻo o le fogaeleele (GE Medical Systems). Sa maua ata o le Coronal T2-weighted localizer (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) e faʻamatalaina ai le nofoaga o le lumbar disc mai le L3–L4 i le L5–L6. Sa maua fasi Sagittal plane T2-weighted i faʻatulagaga nei: fast spin-echo sequence ma se taimi toe fai (TR) o le 2200 ms ma se taimi echo (TE) o le 70 ms, matrix; vaʻaiga o le 260 ma le valu stimuli; O le mafiafia o le tipiina e 2 mm, o le va e 0.2 mm.
Ina ua uma ona pu'eina le ata mulimuli ma fasiotia le lapiti mulimuli, ona aveese lea o le tisiketi pepelo, maso ua fa'apipi'i i totonu, ma tisiketi NP mo su'esu'ega histological. Na fa'amauina a'ano i le 10% neutral buffered formalin mo le 1 vaiaso, fa'amamaina i le ethylenediaminetetraacetic acid, ma tipiina le paraffin. Na fa'apipi'i poloka a'ano i totonu o le paraffin ma tipiina i ni vaega sagittal (5 μm le mafiafia) e fa'aaoga ai se microtome. Na valiina vaega i le hematoxylin ma le eosin (H&E).
A maeʻa ona aoina mai tisiketi intervertebral mai lapiti i vaega taʻitasi, ona aveese lea o le RNA atoa e faʻaaoga ai le koluma UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Saina) e tusa ai ma faʻatonuga a le kamupani gaosi ma le ImProm II reverse transcription system (Promega Inc., Madison, WI, ISA). Sa faia le reverse transcription.
Sa fa'atinoina le RT-qPCR e fa'aaoga ai le Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) ma le SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) e tusa ai ma fa'atonuga a le kamupani gaosi oloa. O le aofa'i o le tali atu o le PCR e 20 μl ma sa i ai le 1.5 μl o le cDNA ua fa'avaivaia ma le 0.2 μM o primer ta'itasi. O Primers na mamanuina e le OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) ma gaosia e le Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Saina) (Laulau 1). O tulaga nei o le ta'amilosaga fa'avevela na fa'aaogaina: la'asaga muamua o le fa'agaoioiga o le polymerase i le 94°C mo le 2 minute, ona sosoo ai lea ma le 40 ta'amilosaga e 15 sekone i le 94°C mo le fa'aleagaina o le template, fa'amafanafana mo le 1 minute i le 60°C, fa'alauteleina, ma le fluorescence. Sa fa'atinoina fua mo le 1 minute i le 72°C. O fa'ata'ita'iga uma na fa'ateleina fa'atolu ma o le averesi o le tau na fa'aaogaina mo le au'ili'iliga o le RT-qPCR. Sa iloiloina fa'amaumauga o le fa'ateleina e fa'aaoga ai le FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, ISA). O le fa'aalia o le IL-4, IL-17, ma le IFN-γ gene sa fa'atulagaina i le endogenous control (ACTB). O le maualuga o le fa'aalia o le mRNA fa'atatau sa fuafuaina e fa'aaoga ai le metotia 2-ΔΔCT.
Sa aveeseina le porotini atoa mai aano e faaaoga ai se homogenizer aano i totonu o le RIPA lysis buffer (o loo i ai se protease ma se phosphatase inhibitor cocktail) ona centrifuged lea i le 13,000 rpm mo le 20 minute i le 4°C e aveese ai otaota aano. E limasefulu maikokalama o porotini na utaina i laina taitasi, vaevaeina e le 10% SDS-PAGE, ona faaliliuina lea i totonu o se membrane PVDF. Sa faia le poloka i le 5% susu mago e leai se ga'o i le Tris-buffered saline (TBS) o loo i ai le 0.1% Tween 20 mo le 1 itula i le vevela o le potu. Sa fa'afefiloi le membrane ma le rabbit anti-decorin primary antibody (diluted 1:200; Boster, Wuhan, Saina) (diluted 1:200; Bioss, Beijing, Saina) i le po atoa i le 4°C ma tali atu i aso lona lua; fa'atasi ai ma le antibody lona lua (goat anti-rabbit immunoglobulin G i le 1:40,000 dilution) fa'atasi ma le horseradish peroxidase (Boster, Wuhan, Saina) mo le 1 itula i le vevela o le potu. Na iloa fa'ailoga o le Western blot e ala i le fa'ateleina o le chemiluminescence i luga o le membrane chemiluminescent ina ua mae'a le fa'avevela o le X-ray. Mo le au'ili'iliga o le densitometric, na scan ma fuaina blots e fa'aaoga ai le polokalama BandScan ma o taunu'uga na fa'aalia o le fua fa'atatau o le immunoreactivity o le gene target i le immunoreactivity o le tubulin.
Sa faia ni fuafuaga fa'amaufa'ailoga e fa'aaoga ai le afifi polokalama SPSS16.0 (SPSS, USA). O fa'amaumauga na aoina i le taimi o le su'esu'ega na fa'aalia o le averesi ± le fa'aletonu masani (averesi ± SD) ma au'ili'iliina e fa'aaoga ai le au'ili'iliga o fua fa'atatau e tasi le itu (ANOVA) e iloa ai eseesega i le va o vaega e lua. O le P < 0.05 sa manatu e taua fa'amaufa'ailoga.
O le mea lea, o le faʻavaeina o se faʻataʻitaʻiga manu o le MC e ala i le totoina o NPs autologous i totonu o le vertebral body ma le faia o le matauina o le macroanatomical, suʻesuʻega MRI, iloiloga histological ma le suʻesuʻega molecular biology e mafai ona avea ma se meafaigaluega taua mo le iloiloina ma le malamalama i faiga o le MC o le tagata ma le atinaʻeina o ni togafitiga fou.
Auala e sii mai ai lenei tusiga: Han, C. et al. O se faʻataʻitaʻiga manu o suiga Modic na faʻatuina e ala i le totoina o le autologous nucleus pulposus i totonu o le ponaivi subchondral o le lumbar spine. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
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Taimi na lafoina ai: Tesema-13-2024